外周神经损伤是临床骨科、神经外科高发病症多由外伤、手术创伤、局部压迫、机械损伤等因素引发其中坐骨神经损伤最为常见。坐骨神经损伤后易诱发持续性神经病理性疼痛、肢体运动功能障碍、感觉减退、神经脱髓鞘及细胞凋亡等一系列病理改变且临床修复难度大、预后效果差极易遗留长期后遗症是目前神经医学领域的研究重难点。受制于人体实验的伦理限制坐骨神经损伤SNI大鼠模型成为替代临床样本、开展外周神经损伤机制研究的核心工具。该模型可精准复刻人类坐骨神经机械性损伤后的病理演变全过程包括神经水肿、髓鞘损伤、神经元凋亡、自噬异常及慢性痛敏反应等模型表型稳定、个体差异小能够完美适配神经损伤机制探究、神经保护药物筛选、抗炎镇痛药效评价、神经再生修复技术验证等各类科研场景是神经科学、药理学、再生医学领域高分课题的首选动物模型之一。目前国内多数实验室自主造模存在手术操作不标准、损伤程度不均、假手术对照不规范、取材处理混乱等问题极易导致实验数据重复性差、结果偏差大。基于此武汉云克隆搭建了标准化SNI大鼠模型构建平台统一手术流程、损伤标准、饲养周期与检测体系为科研人员提供高稳定、高复刻的标准化动物模型服务。SNI大鼠模型基础信息模型名称坐骨神经损伤(SNI)大鼠模型英文名称Rat Model for Sciatic Nerve Injury (SNI)产品编号DSI838Ra01原型物种人来源夹闭坐骨神经干导致坐骨神经损伤模式动物品系SPF 级SD大鼠雄性8 周实验分组随机分组对照组模型组阳性药物组受试药物组(三个剂量梯度组)15只每组实验周期4 weeks建模方法对雄性大鼠行腹腔注射麻醉。将大鼠俯卧位固定于鼠固定架上铺孔巾暴露鼠左下肢并剪掉鼠毛。碘酒、酒精消毒三遍于左侧股后正中行纵行、长约6-8mm切口暴露皮下肌肉。用止血钳钝性分离股二头肌、半腱肌、半膜肌后分离出白色、粗大的坐骨神经刺激后左足出现抽动。距坐骨结节6-8mm处定位用大止血钳夹闭坐骨神经干压满3扣挤压5秒钟后松开止血钳间隔10秒后再夹闭5秒钟再放松10秒第三次再夹闭5秒定时。神经干挤压伤宽度约3mm。9-0无创缝线标记后将坐骨神经送回原位整理肌肉缝合创口假手术组大鼠麻醉后仅切开皮肤暴露左侧坐骨神经但不做钳夹在相应部位相同方法标记后缝合。后期取材将取出的动物饲养一周结束后注射水合氯醛麻醉大鼠将鼠仰卧位固定于大鼠固定架上。自颌下至小腹行胸、复联合切口切断肋骨剪断膈肌暴露出跳动的心脏。用16号针头由左心尖刺入左心室用软静脉留置导管沿左心室经主动脉瓣插入主动脉剪开右心耳。先用0.9%生理盐水250ml快速冲洗组织内血液其后用4%多聚甲醛固定液快速推注100ml再缓慢推注100ml直至使鼠尾巴翘起身体逐渐僵硬颜色变白为止。灌注后立即将身体一僵硬的鼠于俯卧位固定于手术台上由胸-骶部沿脊柱正中切开暴露及分离背部肌肉沿十二肋肌部切断T12 L1水平脊柱、脊髓。沿坐骨神经走行切腰4、腰5、骶1段脊髓和包括挤压伤在内的上下各2mm的坐骨神经。同法切取假手术组的相应部位等长标本。分三种方法进行处理及固定。(1) 4%多聚甲醛固定液中固定制备石蜡切片。(2) 2.5%戊二醛液固定后备做电镜。(3)液氮中冷冻备做冰冻切片。组织病理学Figure. HE staining of rat sciatic nerve tissue. A: control group, B: SNI group1、大鼠坐骨组织病理检查坐骨神经组织在4%多聚甲醛中固定24 小时后包埋成石蜡块。石蜡块放在-20℃冰箱中冰一下在切片机上进行切片切片厚度4um置于水槽中展开、捞片和贴片。石蜡切片切好后需要烤片60℃烤片2 小时。进行Loyez苏木精染色光镜下观察再生髓鞘的情况。2、 TUNEL检测坐骨神经组织凋亡情况坐骨神经组织切片脱蜡蛋白酶K室温下消化TDT酶反应液37℃孵育 1 h0.3%H2O2抑制内源性过氧化物酶Streptavidin-HRP 室温5minDAB 显色苏木精复染。阴性对照采用无酶标记液去除TDT代替TDT酶反应液。凋亡细胞核呈棕褐色颗粒光镜下观察并计数凋亡细胞。3、电镜观察自噬情况坐骨神经组织2.5%戊二醛液固定制备电镜样品利用电镜在超微结构水平观察坐骨神经组织中自噬情况。应用场景该标准化SNI大鼠模型造模损伤均一、表型稳定、重复性强可全方位适配各类神经科学研究外周神经损伤病理机制、神经炎症、髓鞘损伤修复研究神经病理性疼痛发生机制、痛敏调控及镇痛药物筛选神经元凋亡、自噬、氧化应激相关分子机制研究中药、化药、生物制剂的神经保护、抗炎、促再生药效评价神经再生材料、康复干预手段的效果验证。云克隆标准化动物模型服务优势动物模型的稳定性是科研数据可信、论文结果可重复的核心前提。自主造模常存在手术手法差异、损伤程度不均、分组不标准、取材不规范等问题极易导致实验数据离散度大、实验返工、论文返修。武汉云克隆深耕模式动物服务多年拥有SPF级标准化动物实验室、专业手术操作团队与全流程质控体系可提供坐骨神经损伤SNI大鼠模型一站式造模、饲养、取材、病理检测服务1、标准化造模体系统一手术切口、夹闭力度、损伤时长、定位标准规避人为误差模型成模率高、表型稳定数据重复性极强2、全流程闭环服务可提供动物造模、SPF级饲养、梯度给药干预、标本灌注取材、石蜡/冰冻切片、染色检测、数据分析全套服务一站式解决科研需求3、多维度检测配套可配套病理染色、TUNEL凋亡、电镜检测、免疫组化、qPCR、WB等各类分子实验无缝衔接机制研究与药效评价4、合规可溯源所有实验流程标准化、数据全程存档符合高校、药企、三甲医院科研合规要求适配SCI论文发表、课题结题、新药申报等各类场景。除SNI坐骨神经损伤模型外云克隆可提供各类神经损伤、疼痛、炎症、肿瘤、代谢类标准化动物模型同时配套全系ELISA试剂盒、多因子检测、原代细胞等科研试剂实现动物模型组织检测分子验证一站式科研解决方案高效助力科研成果产出
