犬视网膜色素上皮细胞RPE的分离视网膜色素上皮(retinal pigment epitheliumRPE)细胞是一种来自神经视网膜,能够分化成具有分泌功能的上皮细胞。RPE为视网膜10层结构中的最外层位于脉络膜与视网膜之间是由单层色素上皮细胞所构成排列十分规则细胞呈多角形。材料1、实验动物新生1-3d的乳犬2只2、组织来源眼球3、手术器材手术剪镊、解剖镊、眼科剪镊、手术刀、体式显微镜4、消化酶II型胶原酶5、培养基DMEM/F1210%FBS1%双抗10ng/mL EGF(Cloud-Clone①DMEM/F12GibcoCat#: 51500056②EGFCloud-CloneCat#: APA560Hu01实验步骤1、75%酒精消毒新生犬取出眼球2、用剪刀沿角膜边缘剪开眼球去除视网膜神经层组织收集视网膜色素层组织3、眼科剪剪碎组织加入0.1%的II型胶原酶并用移液枪吸吹散视网膜色素组织放入培养箱中消化1h每隔10min用移液器吹打10下4、完全培养基终止消化将消化液经200目筛网过滤滤液以1000rpm离心5min5、弃上清完全培养基重悬细胞沉淀用将细胞悬液铺于已包被好的T25培养瓶中间隔3d观察换液四、实验过程图片图1 视网膜色素组织五、各阶段的小鼠大脑皮层神经元细胞照片白光图3 细胞白光照片 100X图4 细胞白光照片 100X六、犬视网膜色素上皮细胞的免疫荧光鉴定鉴定方法CK-18特异性抗体免疫荧光鉴定Figure 5 Immunofluorescence identification of Cytokeratin 18 specific antibody (×200)Figure 6 Immunofluorescence identification of Cytokeratin 18 specific antibody (×400)云克隆目前已提供超过560种原代细胞产品和超过3000种细胞制剂覆盖人、大鼠、小鼠、犬、猫、兔、猪、羊等近20个物种。猫源原代细胞目录已涵盖成纤维细胞、脂肪前体细胞、骨骼肌细胞、主动脉平滑肌细胞等多种类型。